客户咨询热线:
15021010459
首页 > 技术文章 > 羊水细胞培养_干细胞搜网_www.stemcell.so

羊水细胞培养_干细胞搜网_www.stemcell.so

发布时间:2014-05-13

阅读:86

羊水细胞培养原文链接:http://www.stemcell.so/article-1041.html

更多干细胞细胞耗材请关注干细胞搜网:http://www.stemcell.so

细胞实验技术操作步骤-干细胞搜网:http://www.stemcell.so/article_cat-69.html

 

干细胞搜网实验室人员教您如何做好羊水细胞培养

 

羊水中含有胎儿脱落的上皮细胞,可在体外培养用以分析胎儿染色体核型。目前国内 外大都采用腹腔羊膜穿刺术,妊娠12-30周的羊水细胞均可培养成功。羊膜腔穿刺取羊水行染色体分析,*孕周为16周左右。因此时羊水增长快,羊水中细 胞较多,细胞培养易于生长,而且不易损伤胎儿。国内多数选择的穿刺时间在妊娠的第16-30周。国外现已较多地采用妊娠早期的羊膜穿刺,但需在B超下定位 及穿刺。羊水量按妊娠时间大致计算(1ml/w)。资料表明,穿刺病例的妊娠结局、分娩方式、胎儿的出生体重等与未穿刺无明显差异。

 

  1、实验材料
  2,5%碘酒、75%酒精、无菌棉签和棉球、镊子、20-22号无菌腰穿针、吸管、培养瓶、培养液(PRMI 1640、199、F10、F12)、小牛血清、秋水仙素、KCL、甲醇、冰醋酸、培养皿、盖玻片等。
  2、培养液配制
  F-12 85%
  小牛血清 15%
  双抗 100u/ml
  小瓶贮藏 4-8℃
  3、操作过程


  A(盖玻片培养法)


  (1)采样:选择妊娠13-14周妇女,在无菌条件下抽取羊水5ml,立即注入无菌离心管中;(2)收集:离心分离细胞,1000rpm10分钟,去 上清,留0.5ml,轻打混匀;(3)接种:30mm培养皿中放盖玻片1张,每片滴混匀的细胞液1-2滴,置培养箱内培养30-60分钟;(4)培养:取 出后从盖玻片外加培养液2ml,静置培养48小时后观察细胞生殖状况并定时换液,5-10天后,可见大量成纤维细胞或上皮样细胞生长;(5)终止培养:当 有大量圆形发亮细胞出现时,加秋水仙素0.02-0.04ug/ml,作用10-12小时;(6)低渗:倒掉培养液,加预温37℃0.075MKCL溶液 5ml,37℃温育30分钟,镜下可见胀大的羊水细胞,加0.5-1ml 3∶1甲醇:冰醋酸固定液预固定;(7)固定:倒掉低渗液,加5ml固定液固定30分钟以上,反复3次;(8)干燥:将附有细胞的盖玻片斜放于培养皿中, 置80℃烤箱处理2-3小时;(9)胶片:将附有细胞的盖玻片用树脂胶封固于玻片上,正面朝外,小心细胞破坏;


  B(常规培养法)


  (1)—(2)相同于盖玻片培养法;(3)接种:将混匀的羊水细胞种置于50ml或100ml细胞培养瓶内,平均10ml羊水细胞收集的细胞种置一瓶 加5-10ml混合培养液。(4)培养:酒精灯火先封口,静置培养48小时后观察细胞贴臂及生长情况,5-10天后可见瓶底面有大量羊水细胞生长;(5) 终止培养:同A法;(6)细胞收集:将培养液倒入一干净离心管中,加0.025%的胰蛋白酶0.5-1ml/瓶,轻轻摇动,使培养瓶底面完全接触消化酶, 然后用弯头吸管吹打,待细胞全部脱落后加前培养液终止胰蛋白酶消化。用吸管移细胞悬液于离心管中。1000-2000rpm10分钟,弃上清,留细胞沉 虑。若一次消化不彻底,可反复消化;(7)低渗及预固定:加预温37℃KCL溶液10ml,37℃温育30分钟,加0.5-1ml新鲜配制的3∶1甲醇冰 乙酸固定液预固定,用气泡吹打细胞使其混匀。(8)固定:用新鲜配制的3∶2甲冰固定三次,每次30分钟。固定液加入时沿管壁缓慢加入;(9)制片及干 燥:用绒毛制片;
(10)分带处理。

扫一扫访问手机站扫一扫访问手机站
访问手机站