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点滴透析综述

发布时间:2021-09-14

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点滴透析的定义:

    DNA溶液制备以后,在操作过程使用的酶或许被使用的化学品的残留多影响。这或许包括过量的盐,SDS, 或者其他抑制物质。为了恰当的使用DNA制备液的结果, 有时需要进行点滴透析。理想情况下,点滴透析能够漂洗酶,去除残留,提供更好和更加准确地结果。

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点滴透析的过程:

  在点滴透析的过程中,缓冲液加到烧杯,培养板,或其他容器中。常用的缓冲液是双蒸水。 一个VS型膜放到缓冲液上面并且光面朝上,这个滤膜会被完全饱和,这个过程大概持续5分钟。同时,很重要看下滤膜是否有气泡,这些气泡会在滤膜和缓冲液之间。DNA通过移液器缓慢滴落到滤膜的中心处。如果DNA保持在滤膜的中间,整个的测试样品可以放在上面。如果DNA发生了移动,那么这个DNA不适合透析。DNA不会保持在滤膜的中心或许需要一个额外的酒精沉淀步骤

这个容器然后盖上约1-4个小时。等待合适的时间之后,DNA使用另外一个移液器进行重新收集然后放入一个微量离心管中,用缓冲液将膜进行漂洗。分光光度计或琼脂糖凝胶电泳用来估计DNA的浓度。这时,有可能影响DNA分析结果的化学物质应该被去除。 

尽管点滴透析可以通过其他缓冲液来进行操作,通常来说推荐双蒸水。点滴透析的过程也可以使用一个样本进行重复如果你发现仍然有没有必要的残留或污染物的话. 当重复点滴透析的过程时,使用新鲜的缓冲液和新的滤膜很重要 -- 然而样品可以需要操作所需要的额外时间

点滴透析的难点:

  点滴透析需要具备一定手工操作水平的熟练性, 因为它不像化学反应这么简单 -- 它需要操作人员能够将滤膜正确的放置,并且能够准确地将DNA滴到膜上. 如果DNA没有准确地滴到滤膜中心或者滤膜丢失, 这个过程或许需要重新开始. 进一步来说滤膜或许会翻转

  因为滤膜会在缓冲液上不可预测的移动, 强烈推荐操作人员先模拟整个操作过程在用真实的样品操作之前。一旦这个过程被掌握后,就比较简单了,只要你理解了各个组分如何整体产生效果。新手进行操作时需要缓慢的加DNA, 这样当组分发生突然移动时可以做出反应


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