客户咨询热线:
15021010459
首页 > 技术文章 > G-Biosciences Spin-OUT离心式脱盐柱 使用说明

G-Biosciences Spin-OUT离心式脱盐柱 使用说明

发布时间:2021-09-14

阅读:158

今天为大家介绍G-Biosciences Spin-OUT离心式脱盐柱的使用方法:

以G-Biosciences离心式脱盐柱Spin-OUT GT-1200 Medi为例:

      G-Biosciences Spin-OUT GT-1200,与Pharmacia的Sephadex G-50的功能类似,都是用来代替比较耗时的传统透析处理,以达到快速纯化蛋白/替换蛋白质缓冲液的目的,不过前者是离心式的,后者是重力式的。GT-1200适宜于纯化分子量大于12,000的蛋白质,有两种上样量规格的:Micro和Medi。没有现成的使用说明材料,听朋友介绍这是非常不错的品牌,在国外很火。感兴趣之余啃下其英文说明书了,先了解下其使用步骤:



一、使用前准备:

     1.上下颠倒数次,将管中的凝胶悬浮起来,然后100×g离心1min,让胶体回到管底。这里有两点需要注意的:1)新的柱子看过去几乎是透明的,不要认为什么填料都没有,其实是颗粒太细了;2)离心力是×g,在离心机上显示的是RCF这个单位,而不是RPM。这两个单位有本质区别,需要特别留意。其中:

     RPM(revolution per minute)为离心机每分钟的转数(单位:周/分钟);RCF(relative centrifugal force)为相对离心力,以地心引力即重力加速度的倍数来表示,一般用×g表示。 两者转换关系如下: RCF=0.0011×r×RPM^2 RPM=(909×RCF÷r)^0.5 r为离心机转子半径(单位:米)。

      2.拔掉两头的塞子,将柱子放在10ml离心管中,1,000×g离心2min以移除储存buffer。离心完成后,即可看见白色的填充料。

二、开始使用(交换buffer)

1. 用缓冲液平衡柱子:加入1-2ml缓冲液,将柱子放到10ml离心管中,静置数分钟让缓冲液全部进入柱体后,再重复加入3-5次。最后以1,000×g离心2min,弃掉收集到的溶液,以保证buffer被全部替换了。

2. 将柱子放到新的离心管中,缓慢加入蛋白质样品。注意,上样量为Medi的柱子最多加入0.5ml样品,上样量为Micro的柱子最多加入0.1ml样品。样品加在柱子中间的凝胶上,而不要碰到树脂部件。加样结束后静置1-2min,让凝胶充分将样品吸收。

3. 将柱子放到一个新的离心管中,1,000×g离心4min,即可获得纯化好样品了。

三、柱子的再生

1. 柱子可以重复利用。

2. 需要用到2×蛋白质洗脱buffer,用量是每1ml填料使用1ml buffer。

3. 加入洗脱buffer后静置5min。

4. 再用5倍填料体积的去离子水冲洗柱子。

5. 最后用30% 的乙醇保存在4℃条件下。


华雅思创生物—g-biosciences全国授权代理

             华雅思创生物集团的子公司——上海华雅思创生物科技有限公司是一家为生命科学领域内的科学研究、细胞治疗和生物制药相关人员提供优质产品和服务的生物高科技公司,公司主办的干细胞搜网(w w w.stemcell.so)为中国干细胞领域大资源库,网站提供:干细胞治疗产品、细胞培养试剂耗材、脐带MSC间充质干细胞培养基、IPS细胞ES胚胎干细胞培养基、DC细胞淋巴细胞无血清培养基、R&D细胞因子等种类丰富的产品;涉及StemCell、HY StemCell、StemRD、CellGenix、PeproTech、Corning、Thermo、Gibco、 PALL、LONZA、BD等国际公司品牌和生产厂家。以“Yes Service"核心服务理念,紧紧围绕“Yes Service focus on Biology 越服务 专注生物"打造中华民族全新服务体系,我们与客户携手一起探索生命科学奥秘,解决人类健康问题,发展绿色环保生态,推动世界和谐持续发展。


扫一扫访问手机站扫一扫访问手机站
访问手机站