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对照样品在免疫印迹中的作用

发布时间:2021-09-14

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  对照样品在免疫印迹结果的判定上起着非常重要的作用。对照样品是使用抗体来检测样品中的蛋白。当使用免疫印迹来决定某个样品中蛋白表达的水平时,上对照样是用来保证结果不是由于上样问题或者蛋白转印的错误。当使用上样对照时,正确类型的对照首先需要选择出来。

上对照样品的好处

  上对照样品有很多好处,通常来说关于质量。没有一个上样对照,免疫印迹的结果不能发布因为不能足够的证实。因为这样,上对照样对于那些想要发表的研究来说非常重要。当有一个上样对照的时候,常见的错误比如转印失败会变得非常突出。这减少了花在那些不能使人信服的或不正确的结果上的时间。

进一步讲,类似于边缘效应的问题 -- 当蛋白从外部的泳道向中心漂移 -- 可以排除通过使用上样对照,优化调整整个印迹过程,上样对照可以用来进一步减低不规则蛋白表达水平的影响。在任何情况下蛋白会被要么上样或者转印错误所影响,上对照样就显得尤为重要.

常用的上样对照

  有几种主流类型的上样对照. 取决于免疫印迹本身,任何这些蛋白或者是理想的选择. 如下是常用的上样对照

· Actin. Actin是对于全细胞和细胞质抽提的应用来说是理想的选择。有各种形式可供选择, Actin是极其多用途的上样对照Actin不能用于骨骼肌肉样品,因为它是肌肉活动的主要组分。

· GAPDH. 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)是另外一个全细胞和细胞质抽提上样对照. 通过打断葡萄糖和碳分子GAPDH作为糖酵解催化剂.    

· Porin. Porin对于线粒体蛋白来说是一个理想的上样对照. Porin是一个电压依赖性的阴离子选择通道蛋白, 在很多组织中都得到了发现  

· Lamin B1. 主要适用于核蛋白膜Lamin B1 理论上人为主要负责细胞内细胞核一些元素的稳定. Lamin B1不应该作为上样对照当没有核膜的时候

· TBP. TATA 结合蛋白 (TBP)是另外一个核蛋白的上样对照. 它是一个转录结合蛋白, TBP 直接和RNA聚合酶II一起发挥作用在DNA定序中被发现。  

除了有不同类型的上样对照,而且上样对照也有不同的产品形式,包括没有偶联或偶联特定的标记, 酶或者染料用于简单的检测.

使用上样对照的缺点

  由于涉及到许多准确性的检查,一个上样对照会增加每次免疫印迹的成本和时间。不管这是否有价值这都取决于实验室的应用以及他们的需求。因为上样对照必须要购买,使用上样对照的准确成本取决于这个上样对照哪里采购以及采购成本。进一步讲,针对某个特定的应用使用错误的上样对照会导致一些准确性和结果产生的相关问题。尽管如此,上样对照是得到可靠检测的要求。

那些不熟悉使用上样对照的实验室或许需要首先了解他们实验室的需求 -- 以及对于他们来说合适的上样对照



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