BD 流式校准微球 仪器质控微球655050

中文名称    BD 流式校准微球 仪器质控微球655050    

货号           655050    

品牌           BD Biosciences    

规格          50 Tests/瓶，3 mL/瓶    

微球组成    等量3μm亮珠 + 3μm中等亮度珠 + 2μm暗珠    

基质           聚苯乙烯微球    

悬浮液       含BSA和0.1%叠氮·化钠的PBS    

荧光染料    FITC、PE、PerCP-Cy5.5、PE-Cy7、APC、APC-Cy7、APC-H7、Alexa Fluor 700、BD Horizon V450/V500/V500-C、Pacific Blue、AmCyan等    

激发激光    蓝色（488nm）、红色（640nm）、紫色（405nm）、紫外（355/375nm）、绿色（532nm）、黄绿色（561nm）    

发射范围    390-800nm    

适用软件    BD FACSDiva™ v7.0及以上    

支持机型    BD FACSCanto™ II（研究用途）、BD FACSAria™系列、BD® LSR数字流式平台    

校准模式    Quick QC（3-5分钟）、Full CS&T（15-20分钟，含补偿矩阵）    

储存条件    2-8℃，避光保存    

禁忌          不可冷冻    

有效期    至瓶签标注日期    

稀释后稳定性    2-8℃避光24小时；15-25℃避光8小时    

监管状态    RUO（Research Use Only）    

包装    单瓶装（655050）；三瓶装套装（655051，150 Tests）    

供应商    上海华雅思创生物科技有限公司    

技术原理

1. 三色微球梯度：模拟真实细胞群体的散射与荧光分布

655050包含三种亮度级别的微球（亮/中等/暗），其设计逻辑模拟真实样本中阳性群、弱阳性群和阴性群的分布：

3μm亮珠：高荧光强度，用于校准检测器线性范围上限及PMT电压优化

3μm中等亮度珠：中等信号，验证检测器在常用工作区间的线性响应

2μm暗珠：低荧光/小颗粒，评估仪器电子噪声背景及灵敏度阈值

通过同时采集三种微球的FSC、SSC及多色荧光信号，BD FACSDiva™软件自动计算各通道的Median荧光强度、%rCV（稳健变异系数）及灵敏度参数（SE），生成Levey-Jennings趋势图，实现仪器性能的纵向追踪。

2. 自动批次文件导入：消除批间差异，确保跨批次数据可比

每瓶655050附有独立批次号（与试剂盒批次号不同），使用前需从BD下载对应批次的微球批次文件（Bead Lot File）。该文件包含：

该批次微球的预期目标荧光强度值

各激光/滤光片组合的光谱重叠因子

用于自动优化补偿矩阵的参考数据

导入后，软件自动将实测值与批次预期值比对，无需手动调整PMT电压或补偿。这一机制消除了不同批次微球间的荧光强度差异，确保实验室数月甚至数年间数据的纵向可比性。

标准操作流程

第一步：新批次文件导入

进入"Resources & Tools"→"Bead Lot Files"

输入瓶签上的微球批次号（非试剂盒批次号），下载对应批次文件

在BD FACSDiva™软件中：Cytometer→CS&T→Import Bead Lot File，导入下载文件

第二步：微球准备

从2-8℃冰箱取出，室温平衡15分钟

涡旋振荡≥30秒（转速≥2000rpm），肉眼确认无沉淀

取50-100μL混匀微球加入12×75mm聚苯乙烯上样管

第三步：上机校准

软件选择：Cytometer→CS&T→选择Quick QC或Full CS&T

上样管置于SIP，流速设为Low（12μL/min）

目标收集≥10,000个微球事件

软件自动执行校准并生成PDF报告

第四步：结果判读

FSC-H：6μm微球群CV≤3%

各荧光通道Median值在预设目标范围内

激光功率波动＜±2%

未通过项标红，需排查或联系工程师

用户常见问题解答

Q：655050与655051有何区别？如何计算采购量？

A： 655050为单瓶装（50 Tests），655051为三瓶装套装（150 Tests，3×50 Tests）。以每日1次Quick QC、每周1次Full CS&T计算，单瓶50 Tests约可用6-7周（假设每周5个工作日）。建议中型实验室按2-3瓶/季度批量采购，降低单次物流成本并确保批次一致性。大型核心平台或CDMO企业建议直接采购655051套装，单价更优。

Q：655050与641319/642412（Diva 6.X版CS&T Beads）能否混用？

A： 不能混用。641319/642412为BD FACSDiva™软件v6.2及更早版本设计的Cytometer Setup & Tracking Beads，其荧光染料配方、批次文件格式及软件接口与v7.0+版本不兼容。655050专为Diva v7.0及以上版本优化，支持超过100种激光和滤光片组合。使用前务必核对软件版本：v7.0+选655050/655051；v6.2及更早选641319/642412。混用将导致校准失败或数据失真。

Q：微球稀释后超过稳定时间还能用吗？

A： 不能。BD明确：稀释后微球在2-8℃避光条件下稳定24小时，15-25℃避光条件下稳定8小时。超过稳定时间后，荧光染料可能发生光漂白或降解，导致Median值漂移、%rCV升高，校准结果不可靠。建议根据当日测试量精确配制，未用完的稀释微球按时丢弃。原瓶未稀释微球在2-8℃避光条件下可稳定保存至瓶签标注的有效期。

Q：655050能否用于补偿矩阵的设定？

A： 可以，但需区分场景。655050的Full CS&T模式包含补偿矩阵的自动优化，适用于日常质控中的补偿验证。但对于新抗体 panel 的初始补偿设定，仍需使用单染样本或专用补偿微球（如BD CompBeads）进行精确补偿。655050的补偿功能更侧重于"验证现有补偿是否漂移"，而非"建立新补偿"。多色实验（≥8色）建议每月用655050 Full CS&T验证补偿，发现漂移及时用CompBeads重新调整。

Q：华雅思创供应的BD流式质控产品线还包括哪些？

A： 华雅思创作为BD授权代理，提供流式细胞术全链条质控方案：

仪器校准：655050/655051 CS&T Research Beads（Diva 7+）、641319/642412 CS&T Beads（Diva 6.X）

补偿设定：BD CompBeads（抗小鼠/抗大鼠/抗人）、BD FC Beads 5-Color Kit

绝对计数：BD Trucount Tubes（含已知数量微球）

分选质控：BD FACS Accudrop Beads（345249）

日常清洗：340345 FACSClean、660585 Detergent Solution、342003 FACSFlow鞘液

验证微球：653144 8-Peak Beads（Accuri）、653145 6-Peak Beads

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