客户咨询热线:
15021010459
首页 > 产品中心 > PCR上下游实验相关试剂 > 逆转录试剂盒 > NEB E6300S cDNA第一链合成试剂盒 逆转录

NEB E6300S cDNA第一链合成试剂盒 逆转录

简要描述:产品名称:NEB E6300S cDNA第一链合成试剂盒 逆转录试剂盒
产品货号:E6300
产品品牌:NEB (New England Biolabs)
买试剂,找华雅,更多生物试剂,就在华雅思创

  • 产品型号:
  • 厂商性质:代理商
  • 更新时间:2024-09-05
  • 访  问  量:191
详细介绍
品牌其他品牌货号E6300S
供货周期现货主要用途cDNA合成
应用领域医疗卫生,生物产业,综合

产品名称:NEB E6300S cDNA第一链合成试剂盒 逆转录试剂盒

产品货号:E6300

产品品牌:NEB (New England Biolabs)

买试剂,找华雅,更多生物试剂,就在华雅思创

NEB E6300S cDNA第一链合成试剂盒 逆转录

ProtoScript® cDNA 第一链合成试剂盒含两种经优化的混合液:M-MuLV 酶混合液和 M-MuLV 反应混合液。M-MuLV 酶混合液含 M-MuLV 反转录酶和小鼠 RNase 抑制剂,M-MuLV 反应混合液含 dNTP 和经优化的缓冲液。该试剂盒还包含两种优化的反转录引物和无核酸酶水。锚定的 Oligo-dT 引物 [d(T)23VN] 迫使引物与 polyA 尾的起始端退火。经优化的随机引物混合液能随机并持续性地与整个 RNA 模板配对,包括 mRNA 和无 polyA 尾的 RNA。合成的第一链 cDNA 产物长度可超过 10 kb


成功合成 cDNA 的要素:

RNA 模板
高纯度的完整 RNA 对于灵敏的 RT-PCR 检测至关重要。RNA 的 A260/A280 比值应至少 1.7 或更高。

总 RNA 或 mRNA 均可用于反转录反应。总 RNA 通常足以进行大多数 RT-PCR 分析。不过,如果需要,可以使用 PolyA Spin mRNA 分离试剂盒(NEB #S1560)或 mRNA 磁性分离试剂盒(NEB #S1550)获得 mRNA。

检测所需的 RNA 量取决于目标转录本的丰度。通常推荐使用 1 ng 至 1 μg 的总 RNA 或 0.1-100 ng 的 mRNA。

cDNA 第一链合成反应
RNA 和引物在 70℃ 条件下变性 5 分钟,可以去除阻碍较长 cDNA 合成的二级结构。不过,可以在某些情况下省略此步骤(结果未发表)。

推荐在 42℃ 条件下温育一小时,以获得最高产量和最大长度。不过,许多靶标用较短的温育时间即可进行检测。例如,对于 2 kb cDNA 合成,温育 5 分钟就足够了。

选择反转录引物
Oligo d(T) 引物是大多数实验的首·选,因为它确保所有 cDNA 拷贝在 mRNA 的 3´ 端终止并产生最长的连续 cDNA。锚定的 Oligo-dT 引物 [d(T)23VN] 迫使引物与 polyA 尾的起始端退火,从而防止在 polyA 尾的内部位点开始退火(1)。不过,如果需要,也可以选择另外两种引物。

随机引物混合液是经优化的六聚体和 d(T)23VN 引物混合液。该混合液能随机地与整个 RNA 模板配对,包括 mRNA 和无 polyA 尾的 RNA(例如核糖体 RNA)。随机引物混合液产生的 cDNA 平均长度较短,可用于检测多个短 RT-PCR 产物。随机引物混合液在各种 RNA 模板中均具有良好的性能。

基因特异引物用于 cDNA 合成反应时,cDNA 产物只能用于扩增该转录本。RNA 起始量较低(低于 10 ng)且只需要一种特定的 cDNA 时,使用这种方法可以获得良好的结果。

推荐的引物浓度:
引物:终浓度
OLIGO d(T)23VN:5 μM
随机引物混合液:6 μM
特异引物:0.1–1 μM


产品名称:NEB E6300S cDNA第一链合成试剂盒 逆转录试剂盒

产品货号:E6300

产品品牌:NEB (New England Biolabs)

买试剂,找华雅,更多生物试剂,就在华雅思创


相关产品推荐:

  • NEB M0277S RNase Inhibitor, Murine: 用于保护RNA免受降解,提高逆转录效率。

  • NEB N0447S DNA Ladder Mix: 用于电泳分析的标准分子量对照,确保片段大小判断准确。

  • NEB M0314S RNase H: 在cDNA合成后消除RNA,增强后续反应效果。

订购消息:
现在即可通过NEB授权代理商华雅思创生物进行订购,买试剂,找华雅,华雅思创生物提供上千种生物试剂耗材。


产品咨询

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7