华雅思创快报：miR-142-3p调控脊椎动物造血干细胞的形成和分化

华雅思创快报：过去关于造血发生的研究主要集中在信号和转录因子，然而近期的研究热点主要是包括microRNAs的表观遗传调控。

研究人员发现在斑马鱼和小鼠中，miR-142-3p在造血干细胞（HSCs）中特异性表达。敲除斑马鱼的miR-142a-3p基因导致主动脉-性腺-中肾（AGM）区的HSCs数量降低，同时胸腺中的T细胞数量也降低。从机制上来讲，miR-142a-3p通过抑制干扰素调节因子7（irf7）介导的炎症信号通路来调节HSCs的形成和分化。

此外，研究者还证实miR-142-3p在小鼠的AGM区HSCs的形成中也发挥了重要的作用，这也暗示了它在脊椎动物中扮演着一个高度保守的角色。该研究还揭示了miR-142a-3p通过抑制irf7信号通路在HSCs的形成和发生过程中起关键作用。本研究中Agilent Zebrafish Oligo Microarrays服务由上海伯豪提供。

本研究是由*动物研究所生物膜与膜生物工程国家重点实验室与北京307医院青藤转化医学中心肿瘤学实验室共同合作完成，文章的通讯作者是中科院动物所的刘峰研究院。研究人员首先以斑马鱼为研究对象，进行一系列功能学实验，发现miR-142a-3p在造血细胞中特异性表达，推测它可能在造血中起了重要的作用。为进一步的证实以上推论，研究者通过敲除miR-142a-3p基因，进行了一系列loss of function的实验，实验数据表明miR-142a-3p是HSC形成和T细胞分化过程中*的因子。进一步研究发现，敲除miR-142a-3p基因影响了造血内皮细胞，进而延缓了zui早的HSCs细胞在胚胎中出现的时间。

为进一步的深入研究miR-142a-3p对HSC的形成和分化的生物学影响，研究者比较了对照组和miR-142a-3p基因敲除组的胚胎，分别提取受精后2天（2dpf）和受精后4天（4dpf）的对照组、突变组AGM区的RNAs，表达谱芯片检测后，发现有70个基因在2dpf和4dpf的胚胎中上调（Figure 4B），采用Pictar和TargetScan预测miR-142a-3p的靶基因，获得4个候选基因，进一步研究发现其中irf7可能是miR-142a-3p在HSCs中作用的zui主要的靶基因。后期，研究者通过qPCR、Western blotting等一系列实验证实irf7是miR-142a-3p的直接靶基因，并非间接的。

那么irf7下游又调控什么呢？为了使整个故事更加完整，研究者试图探究更多，zui终发现irf7与Gcsfr-Nitric Oxide （NO）炎症信号通路可能相关。华雅思创快报认为miR-142a-3p在小鼠造血中也发挥了重要的作用。

原文图解：

Figure 4 irf7 is a direct target of miR-142a-3p. （A） Heat map analysis of gene expression in controls and miR-142a-3p morphants at 2 dpf and 4 dpf. （B） Fold changes of upregulated or downregulated genes at 2 dpf and 4 dpf in miR-142a-3p morphants compared to controls. （C） An imperfect match of irf7 3′ UTR with miR-142a-3p as determined by a calculation using RNAHybrid. （D）Scheme of the PGL3 constructs containing irf7 WT and mutated 3′UTR. （E） Luciferase reporter activity of the reporter containing WT or mutated irf7 3′UTR when co-transfected with the miR-142a-3p duplex into HEK293T cells （mean ± SD, t-test, *P < 0.05, n= 3）. （F） Western blotting images showing that irf7 protein level was decreased in duplex-injected embryos at 4 dpf, compared to controls （left panel）. Quantitative analysis of the western blotting results is shown in right panel.