蛋白提取试剂盒的使用方法

更新时间：2023-02-10

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　　本试剂盒提供全套试剂，适用于从各种哺乳动物细胞（原代或传代细胞、贴壁或悬浮细胞等）和各种实体软组织（如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织）提取总蛋白。提取过程简单方便，无须超速离心机。本试剂盒含有的du特变性剂能够溶解细胞膜包括细胞质膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等蛋白研究。

　　使用方法：

　　A. 细胞总蛋白提取

　　1. 每500 μl裂解液，在使用前数分钟内加入5 μl PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。

　　2. 取5-10×106个细胞，在4℃，500 g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。

　　3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

　　4. 每5×106个细胞中加入500 μl冷的裂解液，混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟。

　　5. 在4℃，16,000 g条件下离心15分钟。

　　6. 快速将上清转移至另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。

　　B. 组织总蛋白提取

　　1. 每500 μl裂解液，在使用前数分钟内加入5 μl PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。

　　2. 取100 mg组织样本剪碎，加入裂解液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。

　　3. 将组织匀浆吸入另一预冷的干净离心管中，在4℃，16000 g条件下离心5分钟。