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流式细胞仪的操作步骤和使用注意事项

发布时间:2022-12-10

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   流式细胞仪是仪器设备中的生物器械,属于分子生物范畴。 流式细胞仪已广泛应用于:免疫学、生物化学、生物学、肿瘤学以及血液学等方面的研究和临床常规工作。具体的说,(1)免疫学用于:研究细胞周期或DNA倍体与细胞表面受体及抗原表达的关系; 进行免疫活性细胞的分型与纯化; 分析淋巴细胞亚群与疾病的关系; 免疫缺陷病如艾滋病的诊断; 器官移植后的免疫学监测等。(2)生物学中的。
  流式细胞仪是以流式细胞术为核心技术,集光学、电子学、流体力学、细胞化学、生物学、免疫学以及激光和计算机等多门学科和技术于一体的先进科学技术设备。是现代科学研究中的先进仪器之一,被誉为实验室的”CT”。流式细胞仪主要由液流系统、光路系统、检测分析系统三部分组成。部分仪器在电子系统中具有分选功能,通过对粒子进行充电和偏转,达到对细胞的分选并分析的目的。
  操作步骤:
  1.  单细胞悬液的制备:将1x105~1x107的细胞放入1.5 m l离心管中3000 r/min 离心5分钟,弃上清;加入FACS缓冲液100 ul 悬浮细胞。
  2.  封闭细胞表面Fc受体:在步骤1中加入Fc受体抗体0.5 ul(0.5 mg/ml),水浴3分钟。
  3.  细胞与荧光抗体结合:在步骤2中加入荧光抗体1 ul(0.5 mg/ml),水浴30分钟。
  4.  洗细胞去除游离的荧光抗体:在步骤3中加入FACS缓冲液350 ul,轻轻混匀,3000 r/min,离心5分钟,弃上清,重复步骤(4)2次。
  5.  上样前处理:取100 ul 仪器缓冲液加入步骤(4)获得的细胞沉淀中,轻轻混匀悬浮细胞,将细胞悬液移入FACS专用管中,准备进行仪器检测和分析。
  注意事项
  1.  减少非特异荧光染色
  (1)细胞的活性和状态:流式细胞仪不但可探测细胞表面的荧光,也可探测细胞内的荧光。因此,如果要检测细胞表面的分子,一定要保证细胞的活性,还应尽可能保持细胞静止,通常在4度进行操作。否则,荧光抗体进入死细胞内,会产生非特异结果。
  (2)封闭抗体的应用是bi不可少的,因为大多数的免疫细胞表面都表达有Fc-R。细胞与抗体相互作用后,一定要用FACS缓冲液洗2~3次,以除去游离的抗体。
  2.  单染色时以FCS常用,FITC标记抗体荧光比较稳定而且价格合适。
  3.  如果同时要检测两种以上的分子,一定要选择不同波长的荧光所标记的抗体。
  流式细胞仪是一种能够探测和计数以单细胞液体流形式穿过激光束的细胞检测装置,由于在检测中使用的细胞标志示踪物质为荧光标记物,因此,用来分离、鉴定细胞的流式细胞仪有被称为荧光激活细胞分类仪,是分离和鉴定细胞群及亚群的一种强而有力的应用工具。
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