高纯度 Type VII 胶原酶（C0773-1.5KU）在原代组织解离中的技术解析

原代细胞分离实验成败核心之一在于胶原酶的酶活纯度与杂酶水平。Merck-Sigma C0773 为来源于溶组织梭菌的 Type VII 高纯度胶原酶，经色谱纯化工艺制备，杂酶活性极低，兼顾高胶原消化活性与低细胞损伤特性，适用于多种软组织、器官原代细胞解离与胶原基质结构研究。华雅思创现货供应货号 C0773-1.5KU 规格产品，可快速支撑细胞生物学、组织工程相关实验开展。

一、产品基础理化与酶学特性

货号：C0773-1.5KU 

产品名称：Collagenase from Clostridium histolyticum，Type VII 胶原酶 

来源：溶组织梭菌（Clostridium histolyticum） 

剂型：冻干粉末 

酶活指标：≥4 FALGPA units/mg 固体，≥700 CDU/mg 固体（CDU 胶原消化单位）；

蛋白含量≥85%（双缩脲法） 

分子量区间：68–130 kDa 

最适 pH：6.3–8.8；钙离子依赖性激活，每摩尔酶需结合 4 个 Ca²⁺发挥催化活性；可被 EGTA、β- 巯基乙醇、谷胱甘肽等螯合剂 / 还原剂抑制。 杂酶质控：酪蛋白酶、梭菌蛋白酶（clostripain）≤1 units/mg 蛋白，低杂蛋白酶是 Type VII 最核心特征。 

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

原理简述：

溶组织梭菌胶原酶可特异性识别并切割胶原蛋白三螺旋结构中 Pro-X-Gly-Pro 序列，区别于普通蛋白酶只能降解变性蛋白；可直接降解天然胶原纤维，打破细胞外基质网架，释放组织内活细胞。Type VII 采用色谱纯化，去除大部分中性蛋白酶、梭菌蛋白酶，在充分降解胶原的同时，大幅降低非特异性蛋白水解对细胞膜、膜蛋白的破坏，适合对细胞活性、表面抗原保留要求高的实验场景。

二、Type VII 胶原酶选型逻辑：和粗型胶原酶的差异

很多实验人员容易混淆不同型号 Sigma 胶原酶：

粗制胶原酶（I/II 型）：胶原酶 + 大量梭菌蛋白酶、中性蛋白酶，解离硬组织效率高，但杂酶会破坏细胞膜、细胞表面受体，容易造成细胞凋亡、抗原丢失；

Type VII（C0773）：高纯化版本，胶原酶主体活性保留，梭菌蛋白酶活性被严格限制。

技术提示：单独使用 C0773 时，单纯胶原降解能力强，但缺少中性蛋白酶辅助；对于致密组织，建议搭配低浓度弹性蛋白酶 / 胰蛋白酶联用，提升解离效率，不建议盲目提高 C0773 浓度，避免长时间酶孵育带来细胞损伤。

三、典型应用场景

原代细胞分离：人 / 小鼠肿瘤组织、肾组织、脑组织、肺上皮组织解离；大鼠肝脏灌注、非实质肝细胞分离、胰腺组织消化。

组织基质结构研究：动脉组织制备、晚期糖基化终产物 AGE 相关组织样本前处理、软骨、玻璃体胶原结构解析。

组织工程：胶原支架降解模型、细胞 - 基质互作体外模型构建。

单细胞测序样本制备：低杂酶优势，减少细胞表面蛋白降解，降低解离过程细胞应激与凋亡，提升单细胞悬液质量。

四、实验实操关键要点

缓冲体系：推荐含 CaCl₂的 TESCA 缓冲液（50 mM TES，0.36 mM CaCl₂，pH7.4），钙离子是酶活必需；EDTA/EGTA 会完·全抑制酶活，配制缓冲液严禁带入重金属螯合剂。

工作浓度参考：常规组织 0.1–5 mg/mL，37℃孵育；根据组织致密程度优化，采用间断震荡消化，每隔 10 min 镜检，组织松散后及时终止消化。

终止方式：含血清培养基稀释，或加入 EDTA 螯合钙离子终止酶反应，不建议长时间高温灭活。

分装建议：收到冻干粉末后，无菌水溶解后分装小管，-20℃保存，避免反复冻融造成酶活衰减。

五、质控与供应说明

Merck-Sigma C0773 批次附带 COA 证书，每批次可追溯 FALGPA、CDU 酶活与杂酶检测数据，满足期刊论文、课题结题的试剂溯源要求。 华雅思创现货供应 C0773-1.5KU 胶原酶（来源于溶组织梭菌），无需漫长订货周期，可同步提供原厂 COA、报关资料，适配高校、科研院所、药企研发实验室采购需求。

结语

胶原酶选型不能只看胶原酶活力数值，杂酶水平往往是原代细胞分离、单细胞实验失败的隐形因素。Merck-Sigma C0773 Type VII 高纯度胶原酶凭借极低梭菌蛋白酶背景，在需要保护细胞活性与膜蛋白的组织解离实验中具备独特优势，是基质研究、原代细胞分离领域的经典试剂。如需 C0773-1.5KU，可联系华雅思创生物，现货快速发货。