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关于鲎试剂的实验方法你了解多少?

发布时间:2022-01-24

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   鲎试剂主要成分是鲎血细胞溶解物经氯仿处理去除了抗脂多糖因子,并加入适量二价钙、镁离子,含有C、B、G因子。
  因此,科学家认为血液呈淡蓝色的鲎在医学研究中有*作用。用鲎血制成试剂,再滴入注射液,若试剂立即凝固或变色,就说明注射液内含有使人发热、休克甚至死亡的细菌内毒素。
  此外,鲎为国家二级保护动物,我们呼吁政府和民间共同加强该“活化石”生物的保护。
  鲎试剂是从栖生于海洋的节肢动物“鲎”的蓝色血液中提取变形细胞溶解物,经低温冷冻干燥而成的生物试剂,专用于细菌内毒素检测和真菌(1,3)-β-D-葡聚糖检测。
  鲎试验法是国际上检测内毒素好的方法,它简单﹑快速﹑灵敏﹑准确,因而被欧美药典及我国药典定为法定内毒素检查法,并已被世界各国所采用。能生产鲎试剂的主要有美国、日本、中国等国家。
  实验方法:
  鲎试剂按实验方法可分为:凝胶法、动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、终点显色法鲎试剂。
  凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。凝胶法是通过观察有无凝胶形成作为反应的终点。此法操作比较简单,经济,不需要专用测定设备,可以进行定性或半定量测定。
  凝胶法鲎试剂常见规格为0.1ml/支或0.2ml/支的单个测试或0.5ml/支至5.2ml/瓶的真空封口西林瓶装的多个测试。使用时一般应加细菌内毒素检查用水复溶后使用。
  特异性鲎试剂,即弃G因子鲎试剂,国内的产品,它专一对内毒素起反应,避免了G因子旁路的干扰,使检测结果更加可靠,在药检和临床检验方面是*的理想检测试剂。
  动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、终点显色法鲎试剂,这四种方法都是定量检测内毒素的。这几种定量法鲎试剂统称光度法鲎试剂。
  根据检测原理,终点浊度法和动态浊度法都属于浊度法。浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。终点浊度法未见商品化产品。动态浊度法(又称动态比浊法)是检测反应混合物的浊度上升某一预先设定的吸光度所需要的反应时间,或是检测浊度增加速度的方法。
  动态浊度法的特点为:1. 能准确定量。2.检测范围宽,可达4个数量级。3.灵敏度高达0.005EU/ml。4. 操作简便,系统自动检测分析,一步即成。5. 经济实用,试剂样品需要量少,可降至50μL。6. 和微生物检测系统Elx808(配套IU)及专用软件TALgent使用,一次可同时检测多达96个样品。
  终点显色法和动态显色法都是属于显色基质法。显色基质法系利用鲎试剂与内毒素反应过程中产生的凝固酶使特定底物显色释放出的呈色团的多少而测定内毒素含量的方法,根据产物颜色判断内毒素浓度,又称为比色法。显色基质法由于不依赖凝固蛋白形成凝胶,抗干扰能力强,特别适用于生物制品(蛋白、疫苗等)和临床样品(黄疸、血液、尿液)的细菌内毒素检测。
  终点显色法是反应时间最短的鲎试验法,只需要16分钟就能得出结果。而且可以偶氮化染色剂,避开某些有色检品自身颜色对鲎试验的干扰。终点显色法不需要特殊的检测仪器就能准确定量。
  动态显色法鲎试剂兼有动态浊度法和终点显色法鲎试剂的优点,抗干扰能力强,使用简单方便,检测范围宽,灵敏度高达0.005EU/ml, 是世界上好的鲎试剂。但是价格较高。
  如果您仅需要检测样品的内毒素*,可以选择凝胶法鲎试剂,通过确定内毒素限值及最大有效稀释倍数,做样品的干扰试验从而确定使用的鲎试剂的灵敏度。如果您需要定量测定样品中内毒素含量则应选择显色基质鲎试剂盒或动态浊度法鲎试剂。日常检测量不大时,可以选择终点显色法鲎试剂,用普通的分光光度计就可完成实验。如果您检测的样品是生物制品、疫苗、血液制品等最好选用终点显色法鲎试剂或动态显色法鲎试剂。如果您日常的检测量比较大,检测的样品对鲎试剂的干扰不大,可选用动态浊度法鲎试剂。动态浊度法鲎试剂特别适用于制药企业对产品生产过程中的内毒素水平的监控。动态浊度法与动态显色法需要带温育系统的动态光度测定仪器及配套软件。微生物检测系统El808(配套IU)适用于所有的定量法鲎试验。