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细胞培养基的操作规程

发布时间:2021-08-20

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   细胞培养基既是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质,也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。
  细胞培养基的操作规程:
  一、复苏
  1.把冻存管从液氮中取出来,当即投入37℃水浴锅中,轻微摇晃。液体都融化后(大约1-1.5分钟),拿出来喷点酒精放到超净工作台里。
  2.把上述细胞悬液吸到装10ml培育基的15ml的离心管中(用培育基把冻存管洗一遍,把粘在壁上的细胞都洗下来),1000转离心5分钟。
  3.把上清液倒掉,加1ml培育基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培育基的10cm培育皿中前后左右轻轻摇晃,使培育皿中的细胞均匀分布。
  4.标好细胞品种和日期、培育人姓名等,放到CO2培育箱中培育,细胞贴壁后换培育基。
  5.3天换一次培育基。
  二、传代
  1.培育皿中的细胞覆盖率到达80%-90%时要传代。
  2.把原有培育基吸掉。
  3.加恰当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行),消化1-2分钟。
  4.细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培育基终止消化。
  5.用移液枪吹打细胞,把细胞都悬浮起来。
  6.把细胞吸到15ml的离心管中,1000转离心5分钟。
  7.倒掉上清液,加1-2ml培育基,把细胞都吹起来。
  8.依据细胞品种把细胞传到几个培育皿中。一般,癌细胞分5个,正常细胞传3个,继续培育。
  三、冻存
  把细胞消化下来并离心(同上)。用配好的冻存液把细胞悬浮起来,分装到灭菌的冻存管中,中止几分钟,写明细胞品种,冻存日期4℃30min,-20℃30min,-80℃过夜,然后放到液氮灌中保存。
  以上为您介绍的是细胞培养基的操作规程,以上知识希望对您有所帮助!
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