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转染试剂的使用方法

更新时间:2022-11-24

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   转染试剂是一种新结构类型的DNA转染试剂。该转染试剂为阳离子聚合物和脂质体的杂合体,具有转染效率高、重复性好、毒性低和稳定性的特点,目前该转染试剂为我公司产品。转染试剂用于哺乳动物细胞的转染,如肿瘤细胞系(常见的细胞有HEK293,CHO,COS-1,COS-7,Hela,NIH3T3等)和原代培养的细胞以及昆虫细胞sf9,sf21等。转染试剂,1.0ml,可用于24孔板转染333次或者6孔板166次转染操作。
  转染试剂的使用方法:
  1、接种细胞:
  对于贴壁细胞,转染前18-24 h进行铺板(不含抗生素),使其在转染时的密度大约在80%左右。对于悬浮细胞,转染当天,配制EZ Trans-DNA复合物之前进行铺板,每500 ?L生长培养基中加入4~8×105cells。
  2、准备EZ Trans-DNA复合物:
  a、对于每孔细胞,将1 μg质粒DNA稀释到40 μL无血清的高糖DMEM培养基(或者OPTI-MEMⅠ培养基),混匀。
  b、对于每孔细胞,将3 μL EZ Trans转染试剂稀释到40 μL无血清的高糖DMEM培养基(或者OPTI-MEMⅠ培养基),轻轻混匀。
  注:无血清的高糖DMEM培养基是稀释液,不能使用含血清的培养基进行DNA和EZ Trans转染试剂的稀释。因为EZ Trans-DNA转染复合物的形成过程不能含有血清。
  c、将稀释好的EZ Trans转染试剂尽快全部加入到已稀释好的质粒DNA中,轻轻混匀。
  d、室温放置10-15 min,以形成EZ Trans-DNA复合物。
  3、转染细胞:
  a、将上述80 μL EZ Trans-DNA转染复合物均匀滴入到含细胞的培养皿中。轻轻晃动培养皿或轻微振荡,让EZ Trans-DNA复合物分散均匀。
  b、在37℃,5% CO2培养箱培养6-18 h,去除含EZ Trans-DNA复合物的培养液,更换新的培养液,继续培养至对转入基因表达分析。
  以上就是转染试剂的相关知识点,希望以上的内容能够对大家有所帮助,感谢您的观看和支持,后期会整理更多资讯给大家,敬请关注我们的网站更新。