转染试剂的使用方法

更新时间：2022-11-24

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　　转染试剂是一种新结构类型的DNA转染试剂。该转染试剂为阳离子聚合物和脂质体的杂合体，具有转染效率高、重复性好、毒性低和稳定性的特点，目前该转染试剂为我公司产品。转染试剂用于哺乳动物细胞的转染，如肿瘤细胞系(常见的细胞有HEK293,CHO,COS-1,COS-7,Hela,NIH3T3等)和原代培养的细胞以及昆虫细胞sf9,sf21等。转染试剂，1.0ml，可用于24孔板转染333次或者6孔板166次转染操作。

　　转染试剂的使用方法：

　　1、接种细胞：

　　对于贴壁细胞，转染前18-24 h进行铺板（不含抗生素），使其在转染时的密度大约在80%左右。对于悬浮细胞，转染当天，配制EZ Trans-DNA复合物之前进行铺板，每500 ?L生长培养基中加入4~8×105cells。

　　2、准备EZ Trans-DNA复合物：

　　a、对于每孔细胞，将1 μg质粒DNA稀释到40 μL无血清的高糖DMEM培养基（或者OPTI-MEMⅠ培养基），混匀。

　　b、对于每孔细胞，将3 μL EZ Trans转染试剂稀释到40 μL无血清的高糖DMEM培养基（或者OPTI-MEMⅠ培养基），轻轻混匀。

　　注：无血清的高糖DMEM培养基是稀释液，不能使用含血清的培养基进行DNA和EZ Trans转染试剂的稀释。因为EZ Trans-DNA转染复合物的形成过程不能含有血清。

　　c、将稀释好的EZ Trans转染试剂尽快全部加入到已稀释好的质粒DNA中，轻轻混匀。

　　d、室温放置10-15 min，以形成EZ Trans-DNA复合物。

　　3、转染细胞：

　　a、将上述80 μL EZ Trans-DNA转染复合物均匀滴入到含细胞的培养皿中。轻轻晃动培养皿或轻微振荡，让EZ Trans-DNA复合物分散均匀。

　　b、在37℃，5% CO2培养箱培养6-18 h，去除含EZ Trans-DNA复合物的培养液，更换新的培养液，继续培养至对转入基因表达分析。