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如何提高蛋白转印效率

发布时间:2021-09-13

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   质量差的蛋白转印在免疫印迹的过程中会导致要么比较弱的信号要么没有信号. 尽管质量差的蛋白转印时有发生,科学家们通常不把它作为一个免疫印迹实验失败的原因。因此,当需要排除质量差的信号的原因时转膜的质量好坏需要首先被考虑

导致转膜差的原因

  质量差的蛋白转印可能发生在抗原水平低的情况下。这种情况的发生通常是因为要么转膜步骤差或胶没有足够的装载. 在实验室中,这在免疫印迹中会作为错误发生从而导致信号的缺失。为了使转印成功膜需要有更高水平的抗原.也会有转印膜自己的问题或者操作时间长短,因为蛋白转印或许需要更长时间取决于实验人员使用的产品. 如果一个蛋白转印被中断或者没有给与足够的时间, 那么转印或许不能产生足够强度的信号 

  另外一个导致质量差转膜的原因是抗体浓度。如果浓度太高或太低, 那么会有很少或者没有信号的转移 你可以分辨出浓度是否太高因为棕色/ 微黄色的条带会在膜上出现被捕获的气泡会提供一个天然屏障对于蛋白转印,这会导致膜和转印的区域是空白的。在真正印迹的过程中很难识别这些捕获的气泡, 这会导致印迹的失败而没有任何物理的暗示为什么会失败 

阻止和检测质量差的蛋白转印

  因为蛋白转印经常被忽视, 实验室人员或许想要整合蛋白确认的过程. 蛋白转印可以通过使用反向染色来进行确认,这会发现任何特定性的问题比如大气泡这些气泡会阻止某些区域不能得到转印。

  有很少的方法可以解决气泡问题. 反而,较好的方法是检测印迹来看是否有气泡。不进行染色的话, 大大部分气泡不会被注意到从而导致最终信号的缺失

  除了染色的方法之外,也有其他的产品,比如 Swift Transfer Pads, 它可以用于降低必要的蛋白的转膜时间阻止潜在的问题发生,比如过热. 他会降低蛋白转膜不完全的比率Swift Transfer Pads可以用于任何类型的蛋白但是对于特别高分子量的蛋白转膜很有帮助。有高分子量的蛋白或许需要更长的转膜时间同时有很大的可能得到质量差的转膜结果。低分子量的蛋白将更加容易的通过膜孔径。

实验人员或许使用包含20%甲醇的转膜缓冲液来进一步协助转膜。如果转膜持续失败,那么操作的时间本身会有一些问题。

  质量差的蛋白转膜如果使用正确的技术可以相对容易找到问题并解决它G-Biosciences有一系列的产品可以为科研人员在转膜和免疫印迹过程中提供更好的准确性和操作速度。通过保证合适的蛋白转膜,很多实验室可以显著降低浪费在印迹和troubleshooting印迹结果上的时间




华雅思创生物-G-Biosciences全国授权代理

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