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原代细胞培养基的冻存与复苏技术工艺

发布时间:2021-07-22

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   原代细胞培养基用于人脐带间充质干细胞分离培养方法的研究。是培养原代细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质,也是培养原代细胞生长和繁殖的生存环境。细胞培养基是人工模拟动物细胞的体内生长环境,维持体外细胞存活和增殖的营养物质基础,其主要功能是为细胞提供适宜的pH和渗透压,以及细胞本身不能合成的各种营养物质。
  原代细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-196℃液氮中,储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。
  原代细胞培养基冻存
  1、选用生长情况好,数量较多的原代细胞,冻存前一天换液一次。
  2、贴壁细胞需用0.25%胰酶常规消化将细胞消化下来,将细胞悬液收集至离心管中。
  3、1000rpm离心5分钟,弃上清液。
  4、沉淀加含DMSO的培养液,计数,调整至(1-10)×106/ml。
  5、将悬液分至冻存管中,每管1ml。
  6、密封冻存管,封口一定要严,否则复苏时易出现爆裂。
  7、用记号笔标明细胞种类,冻存日期。
  8、按下列顺序降温:室温→4℃(20分钟〕→冰箱冷冻室(30分钟)→超低温冰箱(—80℃过夜)→液氮。
  原代细胞培养基复苏
  1、取出细胞,迅速放入37℃温水中快速解冻。
  2、吸出细胞悬液,并加10倍以上培养液。
  3、1000r/分钟离心5分钟,去除上清。
  4、用培养液适当稀释后接种培养瓶,放入37℃ CO2培养箱静置培养。
  镜检细胞贴壁能力。次日更换一次培养液,继续培养。
 
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